GM胃粘液素ELISA試劑盒
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實驗?zāi)康模?/span>
本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中GM胃粘液素的含量。
實驗原理:
寧波 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被GM胃粘液素的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中GM胃粘液素呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
試劑盒組成:
操作步驟:
胃粘液素試劑盒方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
胃粘液素ELISA方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
注意事項:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在酶聯(lián)ELISA試劑盒中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:用直接ELISA檢測試劑盒法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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B2M重組小鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 蛋白 (His 標簽) Protein | GM胃粘液素ELISA試劑盒DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄樣蛋白4抗體 |
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guineapigLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 | 化p21激活激酶3抗體 |
人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3)ELISA 試劑盒 96T/48T | 單羧酸轉(zhuǎn)運蛋4抗體 Anti-MCT4 WB IHC-P IHC-F IF 100ul |
小鼠腎素(Renin)ELISA檢測試劑盒MouseReninELISAKit 96T/48T | BCA蛋白定量檢測試劑盒 庫存10 |
HumanechinococcusaibodyIgGELISAKit人包蟲抗體IgGELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T | 結(jié)腸腫瘤,僅供科研 |
陰溝腸桿菌分離瓊脂(ECIA)
3200元
產(chǎn)品名:陰溝腸桿菌分離瓊脂,培養(yǎng)基
乙酰胺肉湯生化管
3200元
產(chǎn)品名:乙酰胺肉湯生化管,培養(yǎng)基
乙酰胺肉湯
3200元
產(chǎn)品名:乙酰胺肉湯,培養(yǎng)基
胰酪胨大豆多粘菌素肉湯
3200元
產(chǎn)品名:胰酪胨大豆多粘菌素,培養(yǎng)基
胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管
3200元
產(chǎn)品名:胰酪大豆胨液體,培養(yǎng)基
胰酶細胞消化液(不含EDTA)
3200元
產(chǎn)品名:胰酶細胞消化液,培養(yǎng)基
胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)
3200元
產(chǎn)品名:胰酪胨大豆羊血,培養(yǎng)基
胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)
3200元
產(chǎn)品名:胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基,培養(yǎng)基